熒光PCR凍干保護(hù)劑之甘油

多元醇類凍干保護(hù)劑包括甘油、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、叔丁醇、側(cè)金盞花醇等，這一類凍干保護(hù)劑是比較常用較為普遍的凍干保護(hù)劑。以甘油作為凍干保護(hù)劑來(lái)介紹一下在蛋白質(zhì)凍干中的作用。甘油具有良好的滲透能力，可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部和胞內(nèi)大分子形成氫鍵以取代干燥脫除的水分，從而維持蛋白質(zhì)、碳水化合物及脂肪等大分子活性物質(zhì)的原有結(jié)構(gòu)。此外，甘油還可以起到降低細(xì)胞脫水皺縮和緩解復(fù)水腫脹的效果。另外醇和糖類相似均具有醇和糖類羥基官能團(tuán)，均能產(chǎn)生“優(yōu)先水化作用”以及改變體系的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)變溫度等，故在發(fā)揮保護(hù)效果方面和糖類具有一定共性。須知蛋白在使用時(shí)候存在凍融情況下建議可以選甘露醇、右旋糖酐40、蔗糖，另外40%-50%的甘油效果也很好。

PCR試劑凍干示例：

(1)將熒光PCR擴(kuò)增緩沖液、引物、探針、熱啟動(dòng)Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、凍干保護(hù)劑按照配方進(jìn)行混合；

（2）凍干保護(hù)劑可選用：甘油、海藻糖、蔗糖、甘露醇、PEG、PVP、DTT、牛血清白蛋白、吐溫100、甲酰胺、氨基酸等。

（3）將上述混合液灌裝至PCR擴(kuò)增管或者八聯(lián)管中。

（4）進(jìn)行凍干。（5）出倉(cāng)進(jìn)行測(cè)試。（6）配方修正。